Физиолошка отопина пуфер фосфата је пуферски раствор То се обично користи за имунохистохемијско (ИХЦ) бојење и често се користи у биолошким истраживањима. ПБС је раствор соли на бази воде који садржи натријум хидроген фосфат, натријум хлорид и, у неким случајевима, калијум хлорид и калијум дихидроген фосфат.
Имунохистохемијско бојење
Имунохистохемија се односи на процес детекције антигена, попут протеина у ћелијама а пресек ткива коришћењем принципа везивања антитела специфично за биогене марамице. Имунофлуоресцентно бојење је прва метода имунохистохемијског бојења.
Антигени постају видљиви када се коњугују са антителом коришћењем флуоресцентних боја због ан реакција везивања антиген-антитело. Овај процес се дешава када се активира узбудљивом светлошћу одређене таласне дужине под флуоресцентним микроскопом.
Осмоларност и концентрација јона раствора одговарају концентрацијама у људском телу - изотоничне су.
Рецепт за ПБС пуфер
ПБС можете припремити на неколико начина. Постоји више формула. Неки од њих не садрже калијум, док други садрже калцијум или магнезијум.
Овај је рецепт релативно лак. То је за 10Кс ПБС основни раствор (0,1М). Међутим, можете да направите и 1Кс основно решење или започнете са овим 10Кс рецептом и разблажите га на 1Кс. Цео процес траје око 10 минута, а обезбеђена је и опција за додавање Твеен-а.
Шта ће вам требати да направите ПБС заштитни слој
- Натријум-фосфат монобазни (безводни)
- Натријум-фосфат обострани (безводни)
- Натријум хлорид
- Чамци за вагање и вагање
- Магнетна мешалица и мешач
- ПХ сонда која је калибрисана и одговарајућа решења за подешавање пХ
- Волуметријска тиквица од 1 Л
- Твеен 20 (опционо)
Како направити ПБС пуфер
- Тежи 10,9 г безводног натријум-фосфата (два натријум-фосфата) (На2ХПО4), 3,2 г безводног натријум-фосфата монобазни (НаХ2ПО4) и 90 г натријум-хлорида (НаЦл). Отопити у мало испод 1Л дестиловане воде.
- Подесите пХ на 7,4 и раствор доводите до коначне запремине 1Л.
- Пре употребе разблажите 10Кс и по потреби подесите пХ.
- Можете да направите ПБС раствор који садржи 0,5 процената Твеен 20 додавањем 5мЛ Твеен 20 у 1Л раствор.
Савети за прављење ПБС заштитног слоја
Чувајте тампон на собној температури након што сте направили ПБС раствор.
Безводни реагенси могу бити супституисани, али ћете морати да прерачунате одговарајућу масу сваког да бисте применили додате молекуле воде.
Употреба ПБС пуфера
Физиолошка отопина пуњена фосфатима има много користи јер је изотонична и нетоксична за већину ћелија. Може се користити за разблаживање супстанци, а често се користи за испирање посуда ћелија. ПБС се може користити као разблаживач у разним методама за сушење биомолекула јер ће молекули воде у њему бити структурирани око супстанце, на пример, протеина. Биће „осушен“ и имобилизован на чврсту површину.
ПХ остаје стабилан и конзистентан да спречи уништавање ћелија.
Танки филм воде који се веже на супстанцу спречава денатурацију или друге конформацијске промене. Карбонатни пуфери се могу користити у исте сврхе али са мањом ефикасношћу.
ПБС се такође може користити за узимање референтног спектра за мерење беланчевина адсорпција у елипсометрији.