РФЛП и апликације за ДНК анализу

Полиморфизам дужине фракције рестрикције (РФЛП) је молекуларна метода генетске анализе која омогућава идентификацију појединаца на основу јединствених образаца рестрикцијски ензим сечење у специфичним регионима ДНК.

Називана и РФЛП анализом, техника користи предност полиморфизми у генетским кодовима појединих људи. Иако сви припадници неке врсте имају у основи исту генетску структуру, ове мале разлике објашњавају разлике у фенотипу, попут изгледа или метаболизма, међу појединцима.

Техника РФЛП анализе укључује сечење одређеног подручја ДНК са познатом варијабилношћу, са рестрикцијским ензимима, затим раздвајањем фрагмената ДНК агарозном гел електрофорезом и одређивањем броја фрагмената и релативне величине.

Рестриктивни ензим је ензим, протеински молекул, који пресече ДНК на местима рестрикције. У суштини, узорак ДНК се разграђује и пробавља рестриктивним ензимима. Резултирајући фрагменти су раздвојени према њиховим дужинама, а образац величина фрагмената разликоват ће се за сваког тестираног појединца.

Потпуни РФЛП процес захтева обележавање сонде, фрагментацију ДНК, електрофорезу, блоттинг, хибридизацију, прање и ауторадиографију. Откривени РФЛП се визуелно користи помоћу рендгенског филма у ауторадиографији, где се фрагменти ДНК могу прегледати и анализирати након што се електрофорезом одвоје један од другог.

Неке од апликација за РФЛП анализу укључују:

• ДНК отисци прстију: Форензички научници могу користити РФЛП анализу за идентификацију осумњичених на основу узорака доказа прикупљених на месту злочина.
• Очинство: РФЛП се такође користи у одређивању очинства или за проналажење рода.
• Генетска разноликост: Техника се може користити у проучавању еволуције и миграције дивљих животиња, проучавању узгојних образа у животињској популацији и откривању и дијагностицирању одређених болести.

Техника употребе РФЛП детекције варијација генома је витално средство у мапирању генома и анализи генетских болести. Ако се локација одређеног гена болести тражи у одређеном хромозому, истраживачи би анализирајте ДНК чланова породице са болешћу, а затим потражите сличне обрасце наслеђивања у РФЛП-у алели.

Једном када се ген локализује, провођење РФЛП анализе на другим члановима породице могло би открити носилац мутираних гена или сигнализирати укупни ризик од болести. Важно је напоменути да се РФЛП техника не користи у широкој употреби, јер се за анализу ДНК у форензичкој науци и неколико других области користе новије, робусније технике.

Нажалост, техника РФЛП анализе је заморна и спора. Поред тога што не треба велику количину ДНК узорка - узорак би обично требао бити око величине четвртине, што је релативно велики за ДНК узорке - процес, од обележавања сонде до прања и ауторадиографије, може да траје до месец дана до комплетан.

Резултати пројекта Људски геном су у великој мери заменили потребу за РФЛП-ом. Пројекат је омогућио одређивање целокупне секвенце ДНК која се налази у људским ћелијама, људском геному и за идентификацију свих гена у људском геному.