Амплификација ДНК ланчаном реакцијом полимеразе

ПЦР означава полимеразе Ланчана реакција, техника молекуларне биологије за амплификацију сегмената ДНК, генерисањем вишеструких копија помоћу ензима ДНК полимеразе у контролисаним условима. Само једна копија ДНК сегмента или гена може се клонирати у милионе копија, омогућавајући откривање употребом боја и других техника визуелизације.

Развијен 1983. године, процес ПЦР-а омогућио је његово обављање ДНК секвенцирање и идентификовати редослед нуклеотида у појединим генима. Метода користи термичко циклирање или опетовано загревање и хлађење реакције за топљење и репликацију ДНК. Како се ПЦР наставља, „нова“ ДНК користи се као образац за репликацију и настаје ланчана реакција, експоненцијално појачавајући ДНК образац.

ПЦР технике се примењују у многим областима биотехнологије, укључујући протеин инжењеринг, клонирање, форензика (отисак ДНК-а), тестирање очинства, дијагноза наследних и / или заразних болести и за анализа узорака животне средине.

За форензику је ПЦР нарочито користан јер појачава и најмању количину ДНК доказа. ПЦР се такође може користити за анализу ДНК која је стара хиљадама година, а ове технике се користе за идентификацију свега, од мамута старог 800.000, до мумија из целог света.

Овај корак је потребан само за ДНК полимеразе за које је потребан ПЦР са врућим покретањем. Реакција је загревана на температуру између 94 и 96 ° Ц и одржавана 1-9 минута.

Ако поступак не захтева иницијализацију, денатурација је први корак. Реакција је загревана на 94-98 ° Ц током 20-30 секунди. Водоничне везе ДНК шаблона су поремећене и створени су једноланчани молекули ДНК.

Реакциона температура је нижа на између 50 и 65 ° Ц и задржана је 20-40 секунди. Прајмери ​​се лече на једноланчаној ДНК шаблони. Температура је изузетно важна током овог корака. Ако је превише вруће, прајмер се можда неће везати. Ако је превише хладно, темељни премаз може да се веже несавршено. Добра веза настаје када прајмер секвенце уско одговара секвенци шаблона.

Температура током овог корака варира у зависности од врсте полимеразе. ДНК полимераза синтетише потпуно нови ланац ДНК.

Овај корак се изводи на 70-74 ° Ц током 5-15 минута након завршног ПЦР циклуса.

Овај корак није обавезан. Температура се одржава на 4-15 ° Ц и зауставља реакцију.

Током сваког циклуса производ (специфични део ДНК који се реплицира) се удвостручује.

Како ДНК полимераза губи активност и троши реагенсе, реакција се успорава.

Више се не накупља производ.