ПБС или фосфатно пуферирани слани раствор је пуферски раствор то је посебно драгоцено јер опонаша концентрацију јона, осмоларност и пХ течности у људском телу. Другим речима, то је изотонично на људске растворе, тако да је мање вероватно да ће у биолошким, медицинским или биохемијским истраживањима изазвати оштећење ћелија, токсичност или нежељене таложење.
ПБС Хемијски састав
Постоји неколико рецепата за припрему ПБС раствора. Есенцијални раствор садржи воду, натријум хидроген фосфат и натријум хлорид. Неки препарати садрже калијум хлорид и калијум дихидроген фосфат. ЕДТА се такође може додати у ћелијски препарат да се спречи накупљање.
Физиолошка отопина пуфера фосфатима није идеална за употребу у решењима које садрже двовалентни катиони (Фе2+, Зн2+) јер може доћи до падавина. Међутим, неки ПБС раствори садрже калцијум или магнезијум. Такође, имајте на уму да фосфат може инхибирати ензимске реакције. Будите посебно свесни овог потенцијалног недостатка при раду са ДНК. Иако је ПБС одличан за физиолошку науку, имајте на уму да фосфат у узорку пуферираном ПБС-ом може да се исталожи ако је узорак помешан са етанолом.
Типична хемијска композиција 1Кс ПБС има крајњу концентрацију од 10 мМ ПО43−, 137 мМ НаЦл, и 2,7 мМ КЦл. Ево крајње концентрације реагенаса у раствору:
| Со | Концентрација (ммол / Л) | Концентрација (г / Л) |
|---|---|---|
| НаЦл | 137 | 8.0 |
| КЦл | 2.7 | 0.2 |
| На2ХПО4 | 10 | 1.42 |
| КХ2ПО4 | 1.8 | 0.24 |
Протокол за прављење физиолошког раствор-фосфата
У зависности од сврхе, можете припремити 1Кс, 5Кс или 10Кс ПБС. Многи људи једноставно купују таблете ПБС пуфера, растварају их у дестилованој води и подешавају пХ по потреби са хлороводоничном киселином или натријум хидроксид. Међутим, решење је лако направити испочетка. Ево рецепата за слани раствор са 1 и 10 пута са фосфатом:
Реагенс |
Износ додати (1 ×) |
Коначна концентрација (1 ×) |
Износ који треба додати (10 ×) |
Коначна концентрација (10 ×) |
| НаЦл | 8 г |
137 мМ | 80 г |
1,37 М |
| КЦл | 0,2 г |
2.7 мМ | 2 г |
27 мМ |
| На2ХПО4 | 1,44 г |
10 мМ | 14.4 г |
100 мМ |
| КХ2ПО4 | 0,24 г |
1,8 мМ | 2.4 г |
18 мМ |
Опционо: | ||||
| ЦаЦл2 • 2Х2О | 0,133 г |
1 мМ | 1,33 г |
10 мМ |
МгЦл2 • 6Х2О |
0,10 г | 0,5 мМ |
1,0 г | 5 мМ |
- Отопите реагенс соли у 800 мл дестиловане воде.
- Подесите пХ на жељени ниво хлороводоничном киселином. Обично је то 7,4 или 7,2. Користите пХ метар за мерење пХ, а не за папир или другу непрецизну технику.
- Додајте дестиловану воду да бисте постигли крајњу запремину од 1 литра.
Стерилизација и складиштење ПБС раствора
Стерилизација није потребна за неке примене, али ако је стерилишите, раствор поделите у аликвоте и аутоклавите 20 минута при 1,05 кг / цм2) или користити стерилизацију филтера.
Може бити физиолошка отопина фосфата чувати на собној температури. Такође може бити у хладњаку, али 5Кс и 10Кс раствор може талог када се охлади. Ако морате да охладите концентровани раствор, прво га чувајте на собној температури све док нисте сигурни да су се соли потпуно растопиле. Ако се појаве падавине, загревање температуре ће их вратити у раствор. Рок трајања расхладног раствора је 1 месец.
Разблаживање 10Кс решења за прављење 1Кс ПБС-а
10Кс је концентровани или основни раствор, који се може разблажити да би се направио 1Кс или уобичајени раствор. Да би се постигло нормално разређивање, 5Кс раствор се мора разблажити 5 пута, док се 10Кс раствор мора разблажити 10 пута.
Да бисте припремили 1 литарски радни раствор 1Кс ПБС из 10Кс раствора ПБС, додајте 100 мл 10Кс раствора у 900 мл воде. Ово само мења концентрацију раствора, а не грам или моларну количину реагенса. На пХ не сме да се утиче.
ПБС Версус ДПБС
Друго популарно пуферско решење је Дулбеццова пуфер са фосфатом или ДПБС. ДПБС се, попут ПБС, користи за биолошка истраживања и пуфере у опсегу пХ од 7,2 до 7,6. Може се чувати на собној температури. Дулбеццо раствор садржи нижу концентрацију фосфата. То је 8,1 мМ мМ фосфатних јона, док је редовни ПБС 10 мМ фосфата. Рецепт за 1к ДПБС је:
| Реагенс | Износ који треба додати (1к) |
| НаЦл | 8.007 г |
| КЦл | 0.201 г |
| На2ХПО4 | 1.150 г |
| КХ2ПО4 | 0.200 г |
| Опционо: | |
| ЦаЦл2• 2Х2О | 0,133 г |
| МгЦл2• 6Х2О | 0.102 г |
Отопите соли у 800 мл воде. Подесите пХ на 7,2 до 76 користећи хлороводоничну киселину. Подесите крајњу запремину на 1000 мл са водом. Аутоклавите на 121 ° Ц током 20 минута.
Извори
- Дулбеццо, Р.; ет ал. (1954). "Формирање плака и изолација чистих линија са полиомиелитис вирусима". Ј. Екп Мед. 99 (2): 167–182.
- "Физиолошка отопина пуњена фосфатима (ПБС." Протоколи хладне вреле луке (2006). Цолд Спринг Харбор Лаборатори Пресс.