ТБЕ пуфер (Трис-борат-ЕДТА) је пуферски раствор који се састоји од Трис базе, борове киселине и ЕДТА (етилендиаминететраоцтене киселине). Овај пуфер се често користи за електрофорезу гела агарозе у анализи ДНК производа који су резултат ПЦР амплификације, протокола пречишћавања ДНК или експеримента клонирања ДНК.
ТБЕ користи
ТБЕ пуфер је посебно користан за одвајање мањих фрагмената ДНК (МВ <1000), као што су мали производи од рестрикцијски ензим пробавља. ТБЕ има већи капацитет пуферирања и даће оштрије разлучивости од ТАЕ пуфера. ТАЕ (Трис-ацетат-ЕДТА) пуфер је раствор састављен од Трис базе, сирћетне киселине и ЕДТА.
ТБЕ је генерално скупље од ТАЕ и инхибира ДНК лигазу, што може проузроковати проблеме ако су предвиђени кораци за пречишћавање и лигацију ДНК. Помоћу три једноставна корака која слиједе научите како направити ТБЕ тампон. Не би требало да траје више од око 30 минута.
Шта вам је потребно
Да бисте направили ТБЕ пуфер, требаће вам само четири супстанце. Преостали предмети на овој листи су опрема. Четири потребне супстанце су динатријумова со ЕДТА, Трис база, борна киселина и дејонизована вода.
Што се тиче опреме, требат ће вам пХ мерач и стандарди калибрације, према потреби. Поред тога, требат ћете неких чаша од 600 милилитара и боца од 1500 милилитара. Заокруживањем ваших потреба опрема су градуирани цилиндри, траке за мешање и плоче за мешање.
Провјерите инвентар у лабораторији коју ћете користити да бисте били сигурни да имате све што вам је потребно прије него што започнете. Ништа горе није него зауставити се усред припреме решења, јер вам је понестало одговарајућих материјала.
Ако је ваш лабораториј у школи или на радном месту, проверите са одговарајућим особљем да ли има све предмете на залихама. Ако то учините, на крају ћете уштедети време и енергију.
Тежина формуле скраћено је као ФВ. То је атомска тежина елемента помножена са бројем атома сваког елемента у формули, а затим збрајање свих маса сваког елемента заједно.
Стоцк Решење ЕДТА
ЕДТА решење треба припремити пре времена. ЕДТА неће потпуно ући у раствор док се пХ не подеси на око 8,0. За основни раствор од 500 милилитара од 0,5 М ЕДТА, извагати 93,05 грама динатријумове соли ЕДТА (ФВ = 372,2). Затим је растворите у 400 милилитара дејонизоване воде и подесите пХ са НаОХ (натријум хидроксидом). Након тога, раствор долијте до коначне запремине од 500 милилитара.
Основно решење ТБЕ
Направите концентровани (5к) основни раствор ТБЕ вагањем 54 грама Трис базе (ФВ = 121,14) и 27,5 грама борове киселине (ФВ = 61,83) и растварања обе у око 900 милијона деионизоване вода. Затим додајте 20 милилитара 0,5 М (моларност или концентрација) ЕДТА (пХ 8,0) и раствор прилагодите крајњој запремини од 1 литре. Овај раствор се може чувати на собној температури, али ће се у старије растворе формирати талог. Спремник чувајте у стакленим боцама и одбаците ако се створио талог.
Радно решење ТБЕ-а
За електрофорезу агарозног гела, ТБЕ пуфер се може користити у концентрацији од 0,5к (разблажење концентрованог стапа 1:10). Основни раствор се разблажи 10 пута у деионизованој води. Коначне концентрације раствора су 45 мМ Трис-борат и 1 мМ (милимоларни) ЕДТА. Тампон је сада спреман за употребу у покретање гела од агарозе.