ТАЕ пуфер је раствор састављен од Трис базе, сирћетне киселине и ЕДТА (Трис-ацетат-ЕДТА). Историјски је најчешћи пуфер коришћен за агарозни гел електрофореза у анализама ДНК производа који су резултат ПЦР појачање, ДНК протоколи за пречишћавање или Клонирање ДНК експерименти.
Овај пуфер има ниску јонску чврстоћу и низак капацитет пуфера. Најприкладније је за електрофорезу великих (> 20 килобаза) комада ДНК и треба их често мењати или рециркулирати током дужег (> 4 сата) гела. Имајући то у виду, можда бисте требали размотрити прављење неколико серија међуспремника.
С обзиром да је међуспремник једноставно направити и кораци се могу брзо извести, прављење више серија не би требало бити посебно дуготрајно или тешко. Користећи доленаведена упутства, требало би само 30 минута да се направи ТАЕ бафер.
Шта вам треба за ТАЕ пуфер
Будући да прављење ТАЕ међуспремника захтева само брз и једноставан скуп упутстава, број потребних материјала за њега није претјеран. Само ће вам требати ЕДТА (етилендиаминетеросирћетна киселина) динатријумова со, Трис база и ледена сирћетна киселина.
Израда пуфера такође захтева пХ метар и стандарде калибрације, према потреби. Такође ће вам требати чаше од 600 милилитара и 1500 милилитара, као и дипломиране боце. На крају, требаће вам дејонизована вода, траке за мешање и тањири за мешање.
У следећим упутствима, тежина формуле (атомска маса сваког елемента се множи са бројем атома, а затим се маса сваког сабире заједно) скраћује се као ФВ.
Припремите матични раствор ЕДТА
ЕДТА решење је припремљено пре времена. ЕДТА неће потпуно ући у раствор док се пХ не подеси на око 8,0. За залихе од 500 милилитара раствор 0,5 М (моларност или концентрација) ЕДТА, извагати 93,05 грама динатријумове соли ЕДТА (ФВ = 372,2). Отопите га у 400-милилитарској деионизираној води и подесите пХ натријум хидроксидом (НаОХ). Отопину долијте до коначне запремине од 500 милилитара.
Креирајте своје залихе
Направите концентровани (50к) основни раствор ТАЕ вагањем 242 грама Трис базе (ФВ = 121.14) и растварањем у око 750 милилитара дејонизоване воде. Пажљиво додајте 57,1 милилитара ледене киселине и 100 милилитара 0,5 М ЕДТА (пХ 8,0).
Након тога, раствор прилагодите крајњој запремини од 1 литра. Овај основни раствор се може чувати на собној температури. ПХ овог пуфера није подешен и требало би да буде око 8,5.
Припремите радно решење ТАЕ пуфера
Радни раствор 1к ТАЕ пуфера је направљен једноставним разблаживањем основног раствора 50к у дејонизованој води. Коначне концентрације раствора су 40 мМ (милимоларни) трис-ацетат и 1 мМ ЕДТА. Пуфер је сада спреман за употребу у трчању гела од агарозе.
Окончање
Проверите инвентар пре него што почнете да бисте били сигурни да имате све горе наведене материјале за ТАЕ тампон. Ваше снабдевање особљем требало би да вам каже да ли на располагању има све предмете који су вам потребни. Не желите да завршите нешто што вам је усред поступка.